大鼠结肠炎模型建立实验流程

一、实验准备

1. 动物选择

- 选用6-8周龄SPF级雄性SD或Wistar大鼠（体重180-220g），适应性饲养7天，自由摄食饮水。

2. 试剂与器材

- 诱导剂：2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）、葡聚糖硫酸钠（DSS，分子量36-50kDa）或恶唑酮（oxazolone）。

- 器材：大鼠代谢笼、电子天平、灌肠器（1-2mL注射器连接软质导管）、手术器械（若需造瘘）。

3. 环境控制

- 饲养环境：温度22±2℃，湿度50-60%，12h光照/黑暗循环，实验前禁食12h（不禁水）。

二、模型构建方法

1. DSS诱导法（急性结肠炎模型）

- 操作步骤：

1. 将DSS溶解于饮用水中，配制成3-5%浓度溶液。

2. 实验组大鼠自由饮用DSS溶液7天，对照组饮用正常饮水。

3. 每日更换新鲜DSS溶液，监测饮水量和体重变化。

2. TNBS诱导法（慢性结肠炎模型）

- 操作步骤：

1. 大鼠称重后，腹腔注射10%水合氯醛（3mL/kg）麻醉。

2. 用蘸有75%乙醇的棉签清洁肛门，将导管缓慢插入直肠（深度约8-10cm）。

3. 缓慢注入TNBS乙醇溶液（50mg/kg，50%乙醇配制），注射后倒立大鼠1-2分钟防止溶液流出。

4. 对照组注射等体积50%乙醇溶液。

三、模型观察与评估

1. 临床指标

- 每日记录：体重、粪便性状（软便/血便评分）、腹泻频率（采用疾病活动指数DAI评分）。

2. 组织学评估

- 实验终点处死大鼠，取结肠组织：

- 肉眼观察：记录肠壁厚度、溃疡面积及粘连情况。

- 病理切片：HE染色后评估炎症细胞浸润、隐窝破坏、上皮损伤程度（参考组织学评分标准）。

3. 生化检测

- 血清样本：检测炎症因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）、髓过氧化物酶（MPO）活性（反映中性粒细胞浸润）。

四、注意事项

1. 伦理审查：实验需通过动物伦理委员会审批，遵循3R原则（替代、减少、优化）。

2. 剂量优化：预实验确定最佳诱导剂浓度，避免死亡率过高或模型失败。

3. 卫生防护：TNBS具有强致敏性，操作需佩戴手套、护目镜，在通风橱中进行。

通过以上流程，可稳定构建大鼠结肠炎模型，用于炎症性肠病病理机制研究、药物干预效果评估等实验。如需调整模型类型（如慢性、复发性结肠炎），可进一步优化诱导方案。

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